88858cc永利官网于1992年推出了Tet-off系统，这是由Manfred Gossen和Hermann Bujard合作开展的开创性研究成果。相关研究的具体成果以“Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters”一文发表在PNAS期刊。Tet-on/Tet-off系统已成为分子生物学和基因工程领域最经典且广泛应用的可诱导基因表达系统之一。该系统源自大肠杆菌转座子Tn10中的四环素抗性操纵子（TetO），主要由Tet响应元件（TRE，由7个重复的TetO序列构成）、Tet阻遏蛋白（TetR）及其改造蛋白等组成，能够在真核细胞（如哺乳动物细胞）中实现目标基因开启或关闭的精确、可逆和剂量依赖控制。

基本原理

TetR能特异性结合TetO。当细胞内无四环素（Tet）存在时，TetR与TetO结合，阻止下游抗性基因的表达。而当Tet存在时，TetR构象改变，使其与TetO分离，从而解除对抗性基因的抑制，促使抗性蛋白表达，导致细菌产生耐药性。

Tet-off系统原理

tTA是一种融合了TetR和单纯疱疹病毒VP16蛋白转录激活结构域的蛋白，作为四环素阻遏转录激活因子。当多西环素（Dox）不存在时，tTA与TRE结合，启动下游基因的表达；反之，当Dox存在时，tTA的构象发生变化，从TRE上脱落，导致下游基因表达停止。

Tet-on系统原理

反义tTA（rtTA）是由反义TetR（rTetR）和单纯疱疹病毒VP16蛋白转录激活结构域融合而成的蛋白，与tTA功能相反。rtTA在存在四环素的情况下才激活TRE。当Dox缺失时，rtTA不能结合TRE，导致下游基因表达关闭；而在Dox存在时，rtTA构象改变并结合TRE，从而开启下游基因表达。

关键特性与优势

• 高度严谨：在未诱导状态下（Tet-off有Dox；Tet-on无Dox），背景泄露表达通常非常低；而在诱导状态下（Tet-off无Dox；Tet-on有Dox），表达水平接近强组成型启动子。
• 可逆性：通过添加或撤除Dox，可快速实现基因表达的反复开启或关闭，便于研究基因功能动态变化。
• 剂量依赖性：Dox的浓度变化能够精细调控基因表达水平。
• 快速响应：Dox作为小分子能快速穿透细胞膜，基因表达的变化通常在数小时至几天内显著体现。
• 低细胞毒性：常用浓度下，Dox对大多数细胞类型的毒性极低，适合长期实验及体内研究。
• 广泛适用性：成功应用于多种模式生物如小鼠和大鼠。

应用场景

1. 功能基因研究

• 在特定时间、细胞类型或组织中诱导表达某个基因，研究其对细胞表型、信号通路及疾病进程的影响。
• 在转基因动物（如小鼠）中实现时空特异性的基因表达，通过组织特异性启动子驱动rtTA/tTA表达，利用Dox控制在特定组织和时间内的基因开启或关闭。

2. 神经科学研究

该系统可与光遗传学和钙成像技术结合，研究神经系统的功能与机制。例如，利用Tet-off系统结合光敏蛋白，标记与恐惧记忆相关的细胞，通过光遗传激活研究记忆的编码、存储与提取机制。

客户案例分享

客户文章（IF=81）：Yu Y. M., Xia S. H., Xu Z., Zhao W. N., Song L., Pan X., Zhong C. C., Wang D., Gao Y. H., Yang J. X., Wu P., Zhang H., An S., Cao J. L., Ding H. L. An accumbal microcircuit for the transition from acute to chronic pain. Curr Biol, 2025 Apr 21; 35(8): 1730-1749 e5.

使用我司产品支持的病毒包括：AAV2/9-cfos-tTA-WPRE-hGHpA、AAV2/9-TRE-tight-hM3D(Gq)-mCherry-WPRE-hGHpA、AAV2/9-TRE3g-hM4D(Gi)-EGFP-WPRE-hGHpolyA、AAV2/9-TRE3g-hChR2(E123T/T159C)-mCherry-WPRE-hGHpA。

通过tTA-TRE（Tet-Off）系统，作者特异性标记了不同类型急性疼痛激活的伏隔核壳区和核心区神经元，并在疼痛消退后重新激活这些神经元。研究表明，尽管急性疼痛能激活NAcS和NAcC神经元，在疼痛消退后，只有NAcS神经元的再激活可以诱发小鼠的疼痛反应，这提示它们在慢性疼痛发展中可能扮演重要角色。

相关产品列表

如有相关需求或了解更多产品服务，欢迎咨询88858cc永利官网！点击进入店铺，查看更多产品及服务。