背景介绍

裸露的RNA是一种具有负电荷的亲水性大分子，因细胞膜的静电排斥而难以进入细胞，同时也容易受到广泛存在的RNA酶的快速降解。因此，为了使RNA成功进入细胞，需要一种保护性外壳。细胞膜主要由脂质组成，因此可以利用脂质囊泡封装RNA，以便穿过细胞膜并释放到细胞质中。所用的囊泡应该为带正电的脂质，以便与负电的RNA结合。

然而，利用永久性阳离子脂质构成的囊泡，可能因其与细胞膜的静电作用而导致细胞毒性。为了应对内体酸性环境，脂质的结构能够响应并带正电荷。

脂质纳米粒结构

脂质纳米粒(LNP)通常包含四种关键成分：可离子化的阳离子脂质、磷脂（双性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。作为mRNA的传递系统，LNP的作用机制包括多个步骤，确保mRNA安全有效地转移至目标细胞并进行蛋白表达。在LNP中，可电离的阳离子脂质担任重要角色，能够在自组装过程中借由其带正电的特性来包裹带负电的RNA。在中性pH环境下，阳离子脂质保持中性以降低毒性，而在细胞吸收后，随着内体pH的降低，其再次带电以促进内体逃逸。此外，胆固醇和PEG脂质的变化已被证实能调节LNP的物理性质和最终功效。双性离子磷脂通常被称作“辅助脂质”。LNP在保护mRNA、促进细胞内传递及激活免疫反应方面具有关键作用。

LNP转染实验步骤

以下转染步骤为6孔板单孔的参考条件，其他培养形式可参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以充分混合。
3. 加入细胞：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞中，轻轻晃动以实现均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

表1：根据细胞培养容器的mRNA转染指南

实验示意图：

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