在生命科学和医学研究领域，类器官已经成为一种备受瞩目的模型，展现出在疾病机制的探索、药物筛选及精准医疗等方面的巨大潜力。然而，许多科研人员在进行类器官培养时常常遇到一些挑战，比如“无法形成结构”、“细胞活性低”以及“传代失败”等问题。深入分析其根本原因，培养体系中细胞因子的选择与配比或许是成功的关键。接下来，我们将深入探讨经典的类器官培养方案——WENR（Wnt3a、EGF、Noggin、R-Spondins），解析这“四大护法”如何充分发挥作用，助您克服类器官培养的难题。

WENR方案的经典地位

WENR方案由荷兰Hubrecht研究所的Hans Clevers团队最初开发，其核心成分包括Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins，被称为类器官培养的“四大护法”。此方案在类器官的研究与实际应用中不断演化，通过与其他细胞因子或小分子抑制剂的巧妙结合，已衍生出适用于多种类型类器官构建的培养条件。目前，WENR方案已广泛应用于胃、小肠、结肠、胰腺、肝脏等多种类器官的培养。

WENR“四大护法”的具体作用

1. Wnt-3a：干细胞增殖的“发动机”

Wnt-3a作为经典Wnt通路的激活剂，通过稳定β-catenin蛋白，启动下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1），参与细胞的发育、增殖和分化过程。Alessandra Merenda的综述指出，无论成体干细胞的来源如何，其衍生类器官在增殖和干性维持等关键环节，都依赖于经典的Wnt信号通路。在小鼠结肠类器官的构建中，外源性Wnt-3a的添加对其增殖至关重要。未添加Wnt-3a的类器官在超过三天后即无法存活。

2. EGF：细胞增殖的“加速器”

表皮生长因子（EGF）通过与其受体结合，激活MAPK/ERK通路，促进细胞的增殖与存活。EGF能刺激上皮细胞的增殖、血管生成及分化，促进类器官的三维结构形成。尽管EGF并非类器官形成的必需因子，但其能显著增加类器官的体积，因此在胃肠道、肝脏及甲状腺等类器官的培养中被广泛应用。

3. Noggin：抑制分化的“守门员”

Noggin作为一种骨形态发生蛋白（BMP）的内源性抑制剂，能够通过阻断BMP与受体结合，促进干细胞增殖，为类器官的形成提供充足的细胞。Noggin在类器官培养中经常与Wnt-3a和R-Spondins共同使用，以平衡BMP和Wnt的信号通路，促进类器官的生长与分化。

4. R-Spondins：Wnt信号的“放大器”

R-Spondin通过与Frizzled和LRP5/6受体结合，增强Wnt信号的表达，促进干细胞的增殖与类器官结构的形成。研究发现，缺乏R-Spondin时，类器官的生长会在4-5天后停止，而适量添加R-Spondin则能够促进细胞的快速生长。

WENR实战避坑Tips

在WENR方案的应用中，需注意Wnt-3a的过度激活可能导致类器官结构的紊乱，故其浓度必须严格控制；此外，R-Spondin需与Wnt-3a协同使用，以获得最佳效果。EGF易被蛋白酶降解，建议采用无血清培养基，并定期更换，以防止诱导异常分化。

综上所述，类器官的培养难题可通过优化WENR方案、选择合适的细胞因子来克服。在此过程中，选择如88858cc永利官网等GMP级细胞因子可确保实验的成功与稳定。若需获取更多信息或支持，请随时与我们联系，助您在生物医疗领域的研究成功！