88858cc永利官网提供的双荧光素酶报告基因系统是一种广泛应用于生物医疗研究的工具，旨在深入探讨基因表达调控、蛋白质相互作用以及信号通路。自1990年问世以来，这项技术经历了超过三十年的发展。1993年，首个荧光素酶专利获得批准，1996年推出的双荧光素酶报告基因检测系统迅速被生物医疗领域所采用。该系统通常利用两种不同的荧光素酶，其中北美萤火虫（Photinus pyralis）来源的荧光素酶基因和海洋腔肠动物海肾（Renilla reniformis）提取的荧光素酶应用最为广泛。

北美萤火虫荧光素酶编码550个氨基酸，以62kDa的单体酶形式存在，具备直接可被检测的酶活性而无需额外修饰（张菊梅等，2001）。而海肾荧光素酶同样在完成转录翻译后即展现催化活性，其分子量为36kDa（赵斯斯，2012）。

实验原理

本实验利用荧光素酶与底物结合的化学发光特性，将所关注基因的转录调控元件克隆至荧光素酶基因的上游或下游，以构建荧光素酶报告质粒。细胞转染后，经适当的刺激或处理，细胞被裂解，随后测定荧光素酶活性。通过分析荧光素酶的活性变化（即荧光值的变化），可以评估不同刺激对调控元件的影响。Renilla荧光素酶作为内参，有助于消除细胞生长状态、细胞数量及转染效率差异带来的干扰，从而提升实验结果的可靠性。

实验步骤

实验主要步骤包括：

1. 构建报告基因质粒：将目的片段插入荧光素酶表达的载体中。
2. 转染细胞：将报告基因质粒与内参质粒共同转染细胞，通常处理时间为48小时。
3. 细胞处理：根据实验要求对细胞进行不同方式的处理。
4. 裂解细胞：使用裂解液裂解细胞。
5. 测定荧光值：加入荧光素底物，测量萤火虫与海肾荧光素酶的荧光值。
6. 数据处理：计算相对荧光素酶活性，并进行统计分析（如t检验或ANOVA）评估组间差异的显著性。

应用场景

双荧光素酶报告基因系统的应用场景包括：

• miRNA与靶基因的靶向互作研究：验证miRNA与mRNA、lncRNA及cirRNA的相互作用。
• 转录因子与启动子的相互作用研究：探讨转录因子对基因表达的调控。
• 启动子活性分析：验证启动子的表达模式及强度。
• 启动子SNP分析：分析启动子区域的单核苷酸多态性对活性的影响。
• 研究细胞内信号通路的激活与传导：通过测量荧光素酶活性的变化评估信号通路响应。
• 药物筛选：在高通量筛选中评估药物对基因表达的影响。

常见问题与解决方法

88858cc永利官网为您提供相关问题的解决方案：

1. 若荧光值过高，考虑减少质粒转染量，或者在细胞裂解后离心取上清液进行检测。
2. 实验结果不稳定或复孔间差异大，可能因细胞状态不一致或转染效率问题，请确保细胞在对数生长期并优化转染条件。
3. 荧光素酶报告基因相比于荧光蛋白有更高的灵敏度和动态范围，且无需荧光显微镜，适合于活体实验。

如需详细了解88858cc永利官网双荧光素酶报告基因系统的服务内容、交付方式和服务周期，欢迎咨询我们的销售经理。