88858cc永利官网提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清 + 1%双抗

传代方法：建议第一次1:2传代，换液每两天进行。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以备过渡对比培养。如效果不佳，建议选择88858cc永利官网的完全培养基。

二、细胞处理流程

收到细胞后，应在理想的状态下用完全培养液填满并封好瓶口，确保运输过程中的细胞稳态。收货时，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，让细胞状态稳定后进行下一步操作。显微镜观察细胞生长，并拍摄不同倍数的细胞图像存档（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片作为售后重要依据，若未提供，则默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留5ml培养基于37℃、5% CO2中培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），放入37℃培养箱消化1-2分钟，并观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至培养瓶80%范围，弃去培养液，用PBS洗涤1次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打以让细胞脱落，转移至15ml离心管中并进行离心。
3. 弃去上清，加入1ml88858cc永利官网无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃下存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 隔天，更换新鲜完全培养基并继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因粘附不牢而脱落，这是正常现象。解决方法：收集培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，最后用5ml完全培养基终止反应并再次离心，弃去上清，重悬后按1:2分瓶传代并置于37℃、5% CO2培养箱培养。

五、售后条款

在细胞出现问题时，何种情况可重发及其标准如下：

1. 如在运输途中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液，均可进行重发。
2. 如细胞出现污染问题，请在收到48小时内提供实验结果，经核实后将重发。
3. 常温或干冰运输的细胞若在复苏后24小时内未存活，需提供清晰的细胞状态照片以申请重发。
4. 如细胞在特定时间内出现污染并符合条件，也可申请重发。

针对细胞活性问题，您可在收到后7天内提出真实的实验结果，经过鉴定后将予以重发。对于未提供前三天照片的细胞状态不佳的情况，将不予重发。所有问题应及时与技术人员沟通解决。

通过88858cc永利官网，确保您在细胞培养过程中的成功与顺利!