随着工业化的持续发展,新型污染物不断涌现并对生态环境造成威胁。为了防止持久性有机污染物及高富集物质对环境的侵害,化学品管理机构从源头进行管控,要求新化学物质登记必须经过大量实验与研究,并提供相应的数据来实现环境风险评估认证。其中,化学品的生物富集性评估是监管环境风险的关键部分。
一、化学品生物富集性评估
生物富集(bioaccumulation)指生物体从环境中吸收并积累某种化学物质,导致其体内浓度超过环境浓度的现象。测试这种现象的标准方法是OECD测试准则305,主要评估鱼类中生物富集系数(Bioconcentration Factor,BCF)。然而,传统的体内生物富集试验耗时长、成本高且需要大量实验用鱼,难以满足化学品环境风险评估的需求。因此,欧美各国的科研人员开发了多种体外替代测试方法来预测化学品在鱼类中的生物富集情况。
目前广泛采用的体外替代方法是利用定量构效关系(Quantitative Structure-Activity Relationship,QSAR)模型来预测鱼类中的生物富集系数。尽管QSAR模型基于化学品的疏水性,但其結果往往与体内实验结果存在较大差异。因此,为了更准确地预测化学品的生物富集性,有必要在体外模拟化学品的生物转化过程。体外代谢稳定性实验可以通过测定化学品的体外固有清除率(in vitro intrinsic clearance, CLin vitro, int)实现。
二、虹鳟鱼肝S9与肝细胞的生物转化试验
为提高对化学物质在鱼类体内生物富集的预测准确性,需要对其肝脏的生物转化情况进行体外评估。OECD在2018年发布的测试准则319A和319B明确指出,可以通过虹鳟鱼肝细胞(rainbow trout hepatocytes,RT-HEP)和虹鳟鱼肝S9(rainbow trout liver S9,RT-S9)进行生物转化试验,以确定化学物质的体外固有清除率。
实验通常采用底物消减法,通过LC-MS等技术分析化学物质的减少量来计算其清除速率和生物转化率。RT-S9作为一种富含代谢酶的亚细胞组分,可在体外有效模拟化学品的生物转化,成为评估潜在生物蓄积性和代谢稳定性的重要工具。此方法周期短、动物使用量少,尤其适用于不允许使用脊椎动物进行测试的情境。
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